01 焦磷酸测序原理

焦磷酸测序技术是一种准确、定量、简便、快速的核酸序列测定技术。焦磷酸测序反应体系包括DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶等， 以及5′-磷酰硫酸(APS)、荧光素、待测序DNA单链和测序引物等。引物与模板单链DNA退火后，在DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶4种酶协同作用下，将特定的dNTP与单链互补聚合，并释放一次荧光信号。通过检测荧光的释放和强度，达到实时、定量测定DNA序列目的。

图一：焦磷酸反应原理

02 焦磷酸测序主要应用

1. SNP、插入、缺失、CNV等单链多态性研究；

2. DNA甲基化定量测定；

3. 病原微生物快速鉴定；

4. 其他核酸序列测定等。

03 产品规格及包装

规格：23测试/盒，46测试/盒，100测试/盒，200测试/盒，1000测试/盒。

图2  焦磷酸测序试剂盒

04 产品主要成分

DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶、APS、荧光素、碱基、水等。

05 配套技术平台

试剂应用于武汉菲思特生物科技有限公司PYROSEQ-E16焦磷酸测序仪、凯杰PyroMark Q96 、Q48焦磷酸测序仪等焦磷酸测序仪。

06 样本要求

全血、咽拭子、FFPE样本、体液、各种细胞组织、游离DNA等。

07 简要操作步骤（以菲思特焦磷酸测序仪为例）

1. PCR扩增、单链产物转移至测序管；测序管加入 3uL 测序酶和 3uL 测序底物。

2. 取dNTP 排管，依次加入 20μldATPαS、20μl dTTP、20μl dGTP、20μl dCTP。碱基平铺在排管底部。

3. 将清洗水槽、dNTP 排管、测序管放入测序仪指定位置。

4. 启动测序。

5. 测序结束单击“保存”按钮。单击“输出报告”输出基因型结果。

图3 相关试剂、设备例图

图4 检测结果解读示例

08 产品性能指标

准确性：99.95%以上；

重复性：CV≤2%；

测序长度：50bp以上；

最低检出限：0.1%。

菲思特生物聚焦于分子诊断和免疫诊断领域的技术产品开发、生产和市场推广，积极开拓海内外市场，诚邀合作，共谋发展。欢迎更多的合作伙伴就设备及配套试剂展开多样化的合作，菲思特将采取多种优惠政策全面助力各位合作伙伴乘风破浪，共创佳绩！